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基礎(chǔ)信息Product information
產(chǎn)品名稱:

探針法熒光定量PCR試劑盒(研生實(shí)業(yè))

產(chǎn)品簡介:

探針法熒光定量PCR試劑盒運(yùn)輸及保存:低溫運(yùn)輸,-20℃保存,有效期一年。使用本試劑盒提供的陽性對照時(shí),由于其濃度較高,一定要注意不要污染其他試劑和成分。在專門的區(qū)域操作。

產(chǎn)品型號:

廠商性質(zhì):經(jīng)銷商

訪問量:2757

更新時(shí)間:2024-09-12

產(chǎn)品特性Product characteristics

探針法熒光定量PCR試劑盒原理是由一對引物介導(dǎo),能在動(dòng)植物體外對特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,經(jīng)過n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,使得檢測擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強(qiáng)
?
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:

①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。

 

適用范圍【參考值】
1.試劑盒有效性判定:
(1)陽性對照:有典型S型擴(kuò)增曲線或Ct值≤35。
(2)陰性對照:Ct值>38或無Ct值,線形為直線或輕微斜線,無指數(shù)增長期。
2.標(biāo)本結(jié)果判定:
(1)陽性:標(biāo)本檢測結(jié)果Ct值≤35或有明顯指數(shù)增長期。
(2)可疑:標(biāo)本檢測結(jié)果Ct值在35~38范圍內(nèi)。此時(shí)應(yīng)對標(biāo)本進(jìn)行重復(fù)檢測,如重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果Ct值仍在35~38范圍內(nèi),有明顯指數(shù)增長期,則判定為陽性,否則為陰性。
(3)陰性:標(biāo)本檢測結(jié)果Ct值>38或無Ct值。

PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
典型的PCR由(1)高溫變性模板;(2)引物與模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個(gè)循環(huán),通過多次循環(huán)反應(yīng),使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。
其主要步驟是:
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下(通常為93℃-94℃)使其變性解成單鏈;
人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合,兩個(gè)引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長短;
耐熱的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入,以目的基因?yàn)槟0鍙?’→3’方向延伸,合成DNA的新互補(bǔ)鏈。
實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
    10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1(10pM)               2μl
      引物2(10PM)              2μ
      Taq酶(2U/μl)            1μl
      DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
      加ddH2O至               50 μl
   視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項(xiàng)
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。好設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險(xiǎn)有影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品:

XAF1 antibody原裝、分裝型肝炎病毒核心蛋白(19-25)

Aquaporin 4 antibody原裝、分裝型肝炎病毒核心蛋白(59-68)

C2orf68 antibody原裝、分裝型肝炎病毒核心蛋白(107-114)

TRAAK antibody原裝、分裝型肝炎病毒4A區(qū)蛋白(21-34)(JT菌株)

Native Streptavidin protein (10nm Gold)原裝、分裝型肝炎病毒4A區(qū)蛋白(22-33)(FAD菌株)

Sumo 2 + Sumo 3 antibody [8A2] - ChIP Grade原裝、分裝型肝炎病毒非結(jié)構(gòu)4A蛋白(22-34)(H菌株)

Native Streptavidin protein (15nm Gold)原裝、分裝型肝炎病毒核蛋白(88-96)

Native Streptavidin protein (20nm Gold)原裝、分裝型肝炎病毒-1 e2蛋白(484-499)

Recombinant Human PSMA7/HSPC protein原裝、分裝型肝炎病毒-1 e2蛋白(554-569)MMP26 antibody [EP1283Y]原裝、分裝生長激素釋放子,大鼠

MMP8 antibody [EP1252Y]原裝、分裝生長激素釋放子(1-44),人

MMP8 antibody [EP1252Y]原裝、分裝生長激素釋放子-2

MMP8 antibody [EP1252Y]原裝、分裝腸抑胃肽,,大鼠

Nodal antibody [EP2058Y]原裝、分裝腸抑胃肽,豬

Nodal antibody [EP2058Y]原裝、分裝腸抑胃肽(1-30)酰胺,豬

Nodal antibody [EP2058Y]原裝、分裝腸抑胃肽(3-42),人

CD34 antibody [EP373Y]原裝、分裝α-醇溶蛋白(43-49)

CD34 antibody [EP373Y]原裝、分裝胰高血糖素樣肽-1(1-37),人,牛,大鼠,小鼠,荷蘭豬
探針法熒光定量PCR試劑盒基質(zhì)金屬蛋白酶14檢測試盒20mg

基質(zhì)金屬蛋白酶1酶原檢測試盒20mg

基質(zhì)金屬蛋白酶2/明膠酶A檢測試盒20mg

基質(zhì)金屬蛋白酶25檢測試盒20mg

基質(zhì)金屬蛋白酶3/基質(zhì)裂解素1檢測試盒20mg

基質(zhì)金屬蛋白酶4檢測試盒20mg

基質(zhì)金屬蛋白酶5檢測試盒20mg

基質(zhì)金屬蛋白酶7檢測試盒20mg

基質(zhì)金屬蛋白酶8/中性粒細(xì)胞膠原酶檢測試盒20mg

 

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