產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

產(chǎn)品型號(hào)：

廠商性質(zhì)：經(jīng)銷(xiāo)商

訪問(wèn)量：731

更新時(shí)間：2024-11-05

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產(chǎn)品名稱(chēng)：人肺小動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞

組織來(lái)源：肺小動(dòng)脈

產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

培養(yǎng)信息：

包被條件：PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yǎng)基：含FBS、EGF、bFGF、IGF、VEGF、Heparin、Hydrocortisone、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：內(nèi)皮細(xì)胞樣

傳代特性：可傳2-3代

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

人肺小動(dòng)脈內(nèi)皮體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專(zhuān)用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

細(xì)胞簡(jiǎn)介：

人肺小動(dòng)脈內(nèi)皮分離自肺小動(dòng)脈組織；肺動(dòng)脈干是短而粗的動(dòng)脈，自右心室的動(dòng)脈圓錐起始，向左后上方斜升，先在升主動(dòng)脈根部的前面，繼而至其左側(cè)，至主動(dòng)脈弓的下方，約在第5胸椎高度，分為左、右肺動(dòng)脈。左肺動(dòng)脈較短，橫行向左，經(jīng)左主支氣管前方至左肺門(mén)，分兩支進(jìn)入左肺的上、下葉。右肺動(dòng)脈較長(zhǎng)，橫行向右，經(jīng)主動(dòng)脈升部和上腔靜脈的后方達(dá)右肺門(mén)，分3支進(jìn)入右肺上、中、下葉。左、右肺動(dòng)脈的各分支在肺實(shí)質(zhì)內(nèi)又反復(fù)分支，與支氣管的分支伴行，后達(dá)肺泡壁，形成稠密的毛細(xì)血管網(wǎng)。肺動(dòng)脈輸送的是含二氧化碳較多的靜脈血。在肺動(dòng)脈干分叉處稍左側(cè)與主動(dòng)脈弓下緣之間有一結(jié)締組織索，稱(chēng)動(dòng)脈韌帶。管徑在0.3～1mm之間，為小動(dòng)脈（small-artery），小動(dòng)脈包括粗細(xì)不等的幾級(jí)分支，也屬肌性動(dòng)脈。較大的小動(dòng)脈，內(nèi)膜有明顯的內(nèi)彈性膜，中膜有幾層平滑肌，外膜厚度與中膜相近，一般沒(méi)有外彈性膜?？趶皆?span>1mm以下的動(dòng)脈，管壁有完整的平滑肌層及少量的彈性纖維和膠質(zhì)纖維。小動(dòng)脈是決定周?chē)h(huán)阻力大小的主要因素，也是調(diào)節(jié)微循環(huán)灌注量的“總開(kāi)關(guān)"。典型的小動(dòng)脈，其管壁的厚度與管徑相比約為1∶2。中膜的肌層相對(duì)比其他動(dòng)脈為厚，當(dāng)平滑肌在神經(jīng)支配下強(qiáng)力收縮時(shí)，其管腔可以閉塞，而使血液不能流入它所分布的毛細(xì)血管內(nèi)，從而增加了周?chē)貉h(huán)的阻力。如果有許多小動(dòng)脈同時(shí)收縮，可使血壓顯著上升。反之，當(dāng)小動(dòng)脈的平滑肌舒張時(shí)，則可使大量的血液流入毛細(xì)血管，外周阻力明顯下降，血壓降低。終末小動(dòng)脈(terminal arteri-ole)的口徑為20～30μm；后小動(dòng)脈(metar-teriole)，又稱(chēng)毛細(xì)血管前小動(dòng)脈(precapil-lary arteriole)的口徑為12～15μm。管壁內(nèi)均有較稀疏的平滑肌，在毛細(xì)血管前小動(dòng)脈分支的起始部分，管壁平滑肌成分增厚，叫做毛細(xì)血管前括約肌(precapillary sphinc-ter)，其收縮或舒張，可調(diào)節(jié)真毛細(xì)血管的血流量，是調(diào)節(jié)微循環(huán)灌注量的“分開(kāi)關(guān)"。支配小動(dòng)脈平滑肌的交感神經(jīng)纖維，可延伸到終末小動(dòng)脈和后小動(dòng)脈的平滑肌細(xì)胞。在毛細(xì)血管前括約肌上交感神經(jīng)纖維特別豐富。肺小動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞呈單層多角形鋪路石狀分布，該細(xì)胞在維持血管內(nèi)外的動(dòng)態(tài)平衡、合成和分泌細(xì)胞因子和介質(zhì)、維持凝血和纖溶的動(dòng)態(tài)平衡中起重要作用。

方法簡(jiǎn)介：

實(shí)驗(yàn)室分離的人肺小動(dòng)脈內(nèi)皮采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法、并通過(guò)內(nèi)皮細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)：

實(shí)驗(yàn)室分離的人肺小動(dòng)脈內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)步驟：

一、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加4-6mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

二、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

a）、對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細(xì)胞，脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 按5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液，將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。

b）、對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。
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收到細(xì)胞如何處理？

1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請(qǐng)拍照，并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。

2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落；先不要打開(kāi)培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。

4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。

5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長(zhǎng)密度超過(guò)80%，可正常傳代；若未超過(guò)80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。

6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無(wú)菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過(guò)80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過(guò)80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作