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更新時(shí)間：2024-11-05

兔腎臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞

商品屬性：

細(xì)胞簡(jiǎn)介：

兔腎臟微血管內(nèi)皮分離自腎臟；腎臟是兔的重要器官，它的基本功能是生成尿液，借以清除體內(nèi)代謝產(chǎn)物及某些廢物、毒物，同時(shí)經(jīng)重吸收功能保留水分及其他有用物質(zhì)，如葡萄糖、蛋白質(zhì)、氨基酸、鈉離子、鉀離子、等，以調(diào)節(jié)水、電解質(zhì)平衡及維護(hù)酸堿平衡。腎臟同時(shí)還有內(nèi)分泌功能，生成腎素、促紅細(xì)胞生成素、活性維生素D3、前列腺素、激肽等，又為機(jī)體部分內(nèi)分泌激素的降解場(chǎng)所和腎外激素的靶器官。腎臟的這些功能，保證了機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，使新陳代謝得以正常進(jìn)行。腎臟內(nèi)部的結(jié)構(gòu)，可分為腎實(shí)質(zhì)和腎盂兩部分。在腎縱切面可以看到，腎實(shí)質(zhì)分內(nèi)外兩層：外層為皮質(zhì)，內(nèi)層為髓質(zhì)。腎皮質(zhì)位于腎實(shí)質(zhì)表層，富含血管，新鮮時(shí)呈紅褐色，由一百多萬(wàn)個(gè)腎單位組成。每個(gè)腎單位由腎小體和腎小管所構(gòu)成，部分皮質(zhì)伸展至髓質(zhì)錐體間，成為腎柱。腎髓質(zhì)位于腎皮質(zhì)的深面，血管較少，色淡紅，為10-20個(gè)錐體所構(gòu)成。腎錐體在切面上呈三角形。錐體底部向腎凸面，向腎門(mén)，錐體主要組織為集合管，錐體稱腎乳頭，每一個(gè)乳頭有10-20個(gè)乳頭管，向腎小盞漏斗部開(kāi)口。在腎竇內(nèi)有腎小盞，為漏斗形的膜狀小管，圍繞腎乳頭。腎錐體與腎小盞相連接。每腎有7-8個(gè)腎小盞，相鄰2-3個(gè)腎小盞合成一個(gè)腎大盞。每腎有2-3個(gè)腎大盞，腎大盞匯合成扁漏斗狀的腎盂。腎盂出腎門(mén)后逐漸縮窄變細(xì)，移行為輸尿管。腎單位是腎臟結(jié)構(gòu)和功能的基本單位。腎小體包括腎小球和腎小囊。腎小體內(nèi)有一個(gè)毛細(xì)血管團(tuán)，稱為腎小球，腎小球是個(gè)血管球。它由腎動(dòng)脈分支形成。腎小球外有腎小囊包繞。腎小囊分兩層，兩層之間有囊腔與腎小管的管腔相通。腎小管匯成集合管。若干集合管匯合成乳頭管，尿液由此流入腎小盞。微血管又稱毛細(xì)血管。分布于各種組織和細(xì)胞間的微細(xì)的血管。介于微動(dòng)脈和微靜脈之間。平均直徑7-9微米，數(shù)量極多，成網(wǎng)狀分布。管壁由一層內(nèi)皮細(xì)胞及一薄層基膜組成，厚約0.5微米?；ね饷嬗斜咏Y(jié)締組織，其中有纖維細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和周細(xì)胞等。細(xì)的毛細(xì)血管由一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞圍成管腔，較粗的毛細(xì)血管由2-3個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞圍成。分布于肌肉組織、神經(jīng)組織和結(jié)締組織中的毛細(xì)血管，內(nèi)皮細(xì)胞間為縫隙連接（縫隙寬150埃），稱連續(xù)毛細(xì)血管；分布于內(nèi)分泌腺、腎臟等處的毛細(xì)血管，除有縫隙連接外，細(xì)胞本身有許多小孔，（孔徑800-1000埃），稱有孔毛細(xì)血管；分布于肝、脾、骨髓及某些內(nèi)分泌腺的毛細(xì)血管，管腔擴(kuò)大，稱血竇。毛細(xì)血管的管壁薄、通透性大、管徑細(xì)（8-10微米）、數(shù)量多、血流速度慢，這些特點(diǎn)使其成為血液與組織液進(jìn)行物質(zhì)交換的場(chǎng)所，又稱交換血管。血竇（sinusoid）由毛細(xì)血管管腔擴(kuò)大而成，竇壁的一般結(jié)構(gòu)與毛細(xì)血管壁相同，由單層內(nèi)皮細(xì)胞構(gòu)成，內(nèi)皮細(xì)胞膜上有窗孔。不同器官的竇壁結(jié)構(gòu)各有差別。脾血竇的內(nèi)皮細(xì)胞間有較寬裂隙；肝血竇內(nèi)皮細(xì)胞是不連續(xù)的，有較寬的細(xì)胞隙（0.1-0.5微米）；肝、脾血竇的基膜不完整或無(wú)基膜，通透性比毛細(xì)血管大，較大的蛋白質(zhì)和血細(xì)胞可以通過(guò)。肝血竇壁內(nèi)有枯否細(xì)胞，脾血竇內(nèi)外有巨噬細(xì)胞，這兩種細(xì)胞都有吞噬能力，可吞噬清除血液中的異物、細(xì)菌等有害物質(zhì)，是機(jī)體單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)的重要組成分。某些內(nèi)分泌腺的血竇有連續(xù)的基膜。

原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件：

　　一、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)

　　1、細(xì)胞要通過(guò)充分漂洗，以盡量除去消化液的毒性；

　　2、細(xì)胞接種時(shí)濃度要稍大一些，至少為5×108細(xì)胞/L；

　　3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng)；

　　4、 胎牛血清濃度為10%-80%

　　5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

　　6、在起始的2天中盡量減少振蕩，以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落，漂浮；

　　7、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀，應(yīng)將原代細(xì)胞換液；

　　8、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液。

　　二、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)

　　1、原代培養(yǎng)時(shí)要盡量去除紅細(xì)胞；

　　2、短期培養(yǎng)，可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行；

　　3、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi)，進(jìn)行分瓶試驗(yàn)；

　　4、長(zhǎng)期培養(yǎng)時(shí)，淋巴細(xì)胞中要加入生長(zhǎng)因子，白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清，以利細(xì)胞生長(zhǎng)；

　　5、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次；

　　6、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快、細(xì)胞密度較高時(shí)才能進(jìn)行。

方法簡(jiǎn)介：

實(shí)驗(yàn)室分離的兔腎臟微血管內(nèi)皮采用膠原酶消化，結(jié)合內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)：

實(shí)驗(yàn)室分離的兔腎臟微血管內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件：PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yǎng)基：含FBS、EGF、bFGF、IGF、VEGF、Heparin、Hydrocortisone、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：內(nèi)皮細(xì)胞樣

傳代特性：可傳2-3代

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

兔腎臟微血管內(nèi)皮體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

細(xì)胞傳代及凍存：

原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種：

　　① 組織塊培養(yǎng)法

　　組織塊培養(yǎng)是常用、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長(zhǎng)。

　　② 消化培養(yǎng)法

　?、?懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法

　　對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞，如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無(wú)需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

　?、芷鞴倥囵B(yǎng)

　　器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性，可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。

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