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OrigamiB(DE3)pLysS 感受態(tài)細胞培養(yǎng)操作規(guī)程

日期:2024-10-06瀏覽:636次

OrigamiB(DE3)pLysS 感受態(tài)細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:

1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。

2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。

二.細胞處理:

1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:

方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

基本共性:

1、所有的細胞表面均有由磷脂雙分子層與鑲嵌蛋白質(zhì)及糖被構(gòu)成的生物膜,即細胞膜。

2、所有的細胞都含有兩種核酸:即DNA與RNA。

3、作為遺傳信息復制與轉(zhuǎn)錄的載體。

4、作為蛋白質(zhì)合成的機器—核糖體,毫無例外地存在于一切細胞內(nèi),核糖體,是蛋白質(zhì)合成的機器,在細胞遺傳信息流的傳遞中起重要作用。

5、所有細胞的增殖都以一分為二的方式進行分裂。

6、能進行自我增殖和遺傳

7、新陳代謝

8、細胞都具有運動性,包括細胞自身的運動和細胞內(nèi)部的物質(zhì)運動


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