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關(guān)于17羥孕酮elisa試劑盒,你了解多少呢?

日期:2024-05-27瀏覽:188次

  17羥孕酮elisa試劑盒是用于定量測量樣本中17羥孕酮(17-OHP)含量的實(shí)驗(yàn)工具。采用了競爭性抑制酶免疫分析技術(shù)或雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附法。在檢測過程中,特異性抗體與樣本中的17-OHP發(fā)生競爭性結(jié)合反應(yīng),通過酶標(biāo)儀測量反應(yīng)后的顏色深淺來間接反映樣本中17-OHP的濃度。
  下面將詳細(xì)探討17羥孕酮elisa試劑盒其作用、原理及操作方法:
  1、檢測原理
  雙抗體夾心法:該試劑盒采用雙抗體夾心法進(jìn)行檢測。首先將特異性的17羥孕酮抗體包被在微孔板上,然后依次加入待測標(biāo)本和標(biāo)準(zhǔn)品。如果樣本中含有17羥孕酮,它將與包被抗體結(jié)合。
  HRP標(biāo)記的檢測抗體:接著加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體,這種抗體也會與17羥孕酮結(jié)合,形成“抗體-抗原-抗體-HRP”復(fù)合物。
  底物顯色:經(jīng)過溫育和徹d洗滌后,加入TMB底物。在HRP的催化下,TMB轉(zhuǎn)化為藍(lán)色,最終在酸性條件下變?yōu)辄S色。顏色的深淺與樣品中的17羥孕酮含量呈正相關(guān)。
  2、樣品處理
  血清和血漿:使用無熱原和內(nèi)毒素的試管收集血液,并通過離心分離出血清或使用抗凝劑獲得血漿。細(xì)胞上清液和組織勻漿也需通過離心去除顆粒和聚合物。
  保存條件:如果不立即進(jìn)行檢測,應(yīng)將樣本分裝并凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,并在室溫下解凍以確保樣品均勻。
  3、操作步驟
  試劑準(zhǔn)備:將試劑盒和所有試劑在室溫下平衡20分鐘。準(zhǔn)備洗滌緩沖液、底物A和B等。
  加樣和溫育:在設(shè)置好標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔后,加入相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)品和樣本,然后加入HRP標(biāo)記的檢測抗體,封板后在37℃下溫育60分鐘。
  洗板和顯色:溫育后棄去液體,洗板五次,然后加入底物A和B,再次在37℃下避光孵育15分鐘。
  終止反應(yīng)和讀數(shù):加入終止液后,在450nm波長下測定各孔的吸光度(OD值),根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本濃度。
  4、結(jié)果判斷
  繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線:利用Excel或其他軟件,以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo),對應(yīng)OD值為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線。根據(jù)曲線方程計(jì)算各樣本的濃度值。

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